研究者們對潔凈工作臺無菌操作空間環(huán)境的要求越來越高,采用單純的紫外殺菌時間相對較長.借助無毒無害的化學殺菌劑輔助紫外殺菌將會有效地縮短殺菌時間,潔凈工作臺的利用更高效,同時也可延長紫外燈的使用壽命.
1.1 原料實驗室自制果汁,并在室溫下開蓋放置 36 h,果汁與空氣直接接觸,使果汁在自然環(huán)境條件下污染一定濃度的雜菌.
1.2 培養(yǎng)基普通營養(yǎng)培養(yǎng)基:胰蛋白胨 5 g,酵母浸粉 2.5 g,葡萄糖 1.0 g,瓊脂粉 15.0 g,pH 值 7.0,去離子水1 000 mL,121 ℃滅菌 30 min.
1.3 主要儀器與設備YXQ-LS-70A 型高壓滅菌鍋(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);BGZ-240 型烘干箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);SW-CJ-2D 型潔凈工作臺(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠).
1.4 含菌培養(yǎng)皿的準備本文采用直徑為 9 cm 的培養(yǎng)皿(表面積為 3.14×4.52=63.585 cm2),按照平板菌落計數(shù)法測定自制果汁中細菌污染情況,重復 3 次,取平均值.然后吸取自制飲料 1.0 mL 均勻涂布至普通培養(yǎng)基上,涂布后的含菌培養(yǎng)基上細菌分布密度可由公式(1)計算得到.含培養(yǎng)基上細菌分布密度(CFU?cm-2) = 自制果汁中細菌總數(shù)(CFU?mL-1)培養(yǎng)皿表面積(cm2)
1.5 潔凈工作臺乙醇輔助紫外殺菌效果的確定將 21 個含菌培養(yǎng)基分為 7 組,分別置于潔凈工作臺(操作空間為 1150×500×500 mm)中,將培養(yǎng)皿蓋打開,然后開啟紫外燈(40 W)照射 30 min,每隔 5 min 取出 1 組培養(yǎng)皿.潔凈工作臺中均勻噴入 10 mL 75%乙醇溶液,然后按照上述方法將開蓋的含菌培養(yǎng)基置于潔凈工作臺中紫外燈照射 30 min,未經(jīng)紫外線照射的作為陰性對照,取出的培養(yǎng)皿于 37 ℃條件下培養(yǎng) 24 h,進行細菌總數(shù)計數(shù),取 3 次重復的平均值.1.6 潔凈工作臺無菌環(huán)境維持時間的確定將開蓋的含菌培養(yǎng)基置于潔凈工作臺中,采用乙醇輔助紫外線照射 25 min,然后將紫外燈關閉,培養(yǎng)皿繼續(xù)置于潔凈工作臺中 48 h,每隔 12 h 取出 1 組培養(yǎng)皿,置于 37 ℃下培養(yǎng) 24 h,進行菌落計數(shù),每組 3個重復,取平均值.